液相草莓视频在线观看下载使用及故障排除

液相草莓视频在线观看下载使用注意要點:

1.流動相必須用HPLC級的試劑,使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。

2.流動相過濾後要用超聲波脫氣,脫氣後應該恢複到室溫後使用。

3.不能用純乙腈作為流動相,這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

4.使用緩衝溶液時,做完樣品後應立即用去離子水衝洗管路及柱子一小時,然 後用甲醇(或甲醇水溶液)衝洗40分鍾以上,以充分洗去離子。對於柱塞杆 外部,做完樣品後也必須用去離子水衝洗20ml以上。

5.長時間不用儀器,應該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應該用有機相(如甲醇等),因為純水易長黴。

6.每次做完樣品後應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

7.C18柱絕對不能進蛋白樣品,血樣、生物樣品。

8.堵塞導致壓力太大,按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查 並清洗。清洗方法;①以異丙醇作溶劑衝洗:②放在異丙醇中間用超聲波清 洗;③用10%稀硝酸清洗。

9.氣泡會致使壓力不穩,重現性差,所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。

10.如果進液管內不進液體時,要使用注射器吸液:通常在輸液前要進行流動相 的清洗。

11.要注意柱子的PH值範圍,不得注射強酸強堿的樣品,特別是堿性樣品。

12.更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗,然後插入新的 流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。

高效液相色譜常見故障的斷定及解決

(一)保留時間變化

1.柱溫變化 柱恒溫,必要時需配置恒溫箱

2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱

3.緩衝液容量不夠 用》25mmol/L的緩衝液

4.柱汙染 每天衝洗柱

5.柱內條件變化 穩定進樣條件,調節流動相

6.柱快達到壽命 采用保護柱

(二)保留時間縮短

1.流速增加 檢查泵,重新設定流速

2.樣品超載 降低樣品量

3.鍵合相流失 流動相PH值保持在3——7.5檢查柱的方向

4.流動相組成變化 防止流動相蒸發或沉澱

5.溫度增加 柱恒溫

(三)保留時間延長

1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡

2.矽膠柱上活性點變化 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱

3.鍵合相流失 同前(二)3

4.流動相組成變化 同前(二)4

5.溫度降低 同前(二)5

(四) 出現肩峰或分*

1.樣品體積過大 用流動相配樣,總的樣品體積小於*峰的15%

2.樣品溶劑過強 采用較弱的樣品溶劑

3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4.柱內燒結不鏽鋼失效 更換燒結不鏽鋼,加在線過濾器,過濾樣品

5.進樣器損壞 更換進樣器轉子

(五)鬼峰

1.進樣閥殘餘峰 每次用後用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗

2.樣品中未知物 處理樣品

3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)

4.(TFA)氧化(肽譜) 每天新配,用抗氧化劑

5.水汙染(反相) 通過變化平衡時間檢查水質量,用HPLC級的水

(六) 基線噪聲

1.氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣,加柱後背壓

2.汙染(隨機噪聲) 清洗柱,淨化樣品,用HPLC級試劑

3.檢測器燈連續噪聲 更換氘燈

4.電幹擾(偶然噪聲) 采用穩壓電源,檢查幹擾的來源(如水浴等)

5.檢測器中有氣泡 流動相脫氣,加柱後背壓

(七)峰拖尾

1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相

2.峰幹擾 清潔樣品,調整流動相

3.矽羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩衝液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品

4.柱內燒結不鏽鋼失效 同前(四)4

5.柱塌陷或形成短路通道 同前(四)3

6.死體積或柱外體積過大 連接點降至zui低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管

7.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱

(八)峰展寬

1.進樣體積過大 同(四)1

2.在進樣閥中造成峰擴展 進樣前後排出氣泡以降低擴散

3.數據係統采樣速率太慢 設定速率應是每峰大於10點

4.檢測器時間常數過大 設定時間常數為感興趣*峰半寬的10%

5.流動相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動相

6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器

7.保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫

8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至zui小

9.樣品過載 進小濃度小體積樣品